Preparação de Tecido da Bexiga de Camundongo para Visualização de Infecção Bacteriana

Comece com um camundongo eutanasiado com a bexiga exposta, pré-infectado com bactérias patogênicas.

As bactérias invadem o urotélio e formam colônias. Ao amadurecer, essas bactérias rompem a célula epitelial e infectam as células ao redor.

Insira um cateter conectado a uma seringa cheia de fixador. Injete lentamente o fixador para inflar a bexiga e preservar sua arquitetura.

Clampe a uretra para manter o fixador e a forma da bexiga.

Remova o cateter e corte a uretra. Transfira a bexiga para um fixador novo e incube para preservar a estrutura.

Divida a bexiga em dois copos de meia-bexiga para expor o urotélio e enxágue com um tampão.

Tinga com um reagente à base de metal para aumentar o contraste e depois lave com água ultrapura.

Desidrate as seções usando um gradiente de etanol, seguido de secagem em ponto crítico.

Corte cada copo de bexiga seco ao meio.

A amostra agora está pronta para processamento a jusante para visualizar interações hospedeiro-patógeno.

Uma vez que a seringa de ponta deslizante com tuberculina e fixador, fixe um cateter na ponta, bisel voltado para o lado oposto às marcas da seringa.

Corte o excesso de tubo a 1 a 2 milímetros da ponta da agulha, tomando cuidado para não e