Preparando uma Cultura Hemolítica de Staphylococcus aureus para Estudos de Interação Hospedeiro-Patógeno

Comece com uma placa de ágar nutritiva seletiva suplementada com sangue contendo glóbulos vermelhos.

Estria de Staphylococcus aureus (S. aureus), uma bactéria patogênica Gram-positiva, sobre o ágar e incuba.

Durante a incubação, as bactérias utilizam nutrientes, crescem e formam colônias.

S. aureus secreta hemolisina, uma toxina formadora de poros que lisa os glóbulos vermelhos no ágar e produz zonas claras e transparentes ao redor das colônias, indicativas de hemólise.

Selecione uma colônia hemolítica, inocule-a em um caldo de nutrientes e incube em condições rotativas para apoiar o crescimento bacteriano.

Usando um espectrofotômetro, meça a densidade óptica (OD) para determinar a concentração bacteriana.

Com base na leitura do OD, transfira uma aliquota em um caldo nutritivo fresco para diluir as células e incube em banho-maria com agitação.

Meça o OD em intervalos regulares.

Um OD próximo a 0,8 indica que as bactérias atingiram a fase de crescimento exponencial com fisiologia uniforme.

Este S. aureus hemolítico está pronto para estudos de interação hospedeiro-patógeno.

Comece traçando S. Cepas de Aureus de interesse em placas de ágar sanguíneo a partir de um estoque de glicerol congelado e incubando as placas a 37 graus Celsius por 16 a 24 horas para confirmar seus fenótipos hemolíticos com base em sua capacidade de lisar glóbulos vermelhos e formar zonas transparentes e claras.

Inocule isolados de colônia única de cada cepa em 4 mililitros de caldo de soja tríptico, ou TSB, em tubos de vidro estéreis e gire os tubos a 37 graus Celsius por 16 a 24 horas em um rolo tubular em um ângulo de aproximadamente 70 graus e 70 rotações por minuto. Na manhã seguinte, meça a densidade óptica em 600 nanômetros, ou OD₆₀₀, das culturas em um espectrofotômetro e dilua as células para um OD₆₀₀ de 0,05 em 25 mililitros de TSB estéril em uma relação 5 frascos por volume em frascos DeLong de 125 mililitros. Incube as culturas em um banho-maria a 37 graus Celsius a 280 rotações por minuto.