JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:29 min • January 30th, 2026
Pegue um embrião de peixe-zebra infectado com Mycobacterium abscessus, uma bactéria patogênica que ataca o sistema nervoso central e forma abscessos contendo bactérias e células imunes do hospedeiro.
Incubar o embrião no gelo para imobilizá-lo e depois expô-lo a uma overdose de anestésico para interromper a atividade cardíaca e neural, resultando na morte.
Lave o embrião para remover o anestésico residual.
Adicione uma solução detergente para desestabilizar as membranas celulares e lisar o embrião.
Tosquie o lisado através de uma agulha para homogeneizar o tecido e liberar as bactérias.
Centrifuge, descarte o sobrenadante e ressuspenda o pellet em uma solução de surfactante para evitar o aglomeramento bacteriano.
Dilua serialmente a suspensão bacteriana e espalhe-a sobre placas de ágar.
O meio é suplementado com antibióticos para inibir o crescimento de outros microrganismos enquanto as células de Mycobacterium desenvolvidas para resistência a antibióticos proliferam.
Incubar para promover a formação de colônias, possibilitando a quantificação da carga bacteriana do embrião.
Para enumerar as unidades formadoras de colônias ou UFCs no momento desejado, colete cinco embriões por condição de infecção e transfira cada embrião para um tubo microcentrífuga de 1,5 mililitros. Crioanestesie os embriões por incubação no gelo por 10 minutos. Após eutanasiar os embriões com 300 a 500 miligramas por litro de tricaína, use água estéril para lavar os embriões duas vezes em um novo tubo.
Em seguida, após remover água a 2% Triton X-100 em 1 X PBS em cada embrião, use uma agulha calibre 26 para homogeneizar o tecido e garantir a lise completa.
Após centrifugar a suspensão, use 1 PBST para resuspender o pellet. Depois, diluição serial de placas dos homogenados no Middlebrook 7H10OADC suplementada com BBL MGIT PANTA.
Incube as placas a 30 graus Celsius por 4 dias antes de contar as colônias.