Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:19 min. • February 2nd, 2026
Comece com uma cultura de uma cepa de Aeromonas , um patógeno bacteriano, cultivado em um meio rico em nutrientes.
Meça a densidade óptica da cultura e ajuste a concentração bacteriana para garantir uma carga de infecção consistente.
Placar a cultura sobre um meio de crescimento nematoide ou ágar NGM e incubar para formar uma camada bacteriana uniforme.
Preparar larvas de C. elegans sincronizadas com o desenvolvimento — um nematoide bacteriórico mantido em meio enriquecido.
Transfira as larvas para a camada bacteriana e incube para permitir a ingestão oral de Aeromonas e possibilitar a colonização intestinal.
Dentro do hospedeiro, as bactérias se multiplicam e liberam citotoxinas que danificam as células epiteliais intestinais e levam à mortalidade.
Transfira nematoides sobreviventes para placas bacterianas frescas e conte diariamente o número de vermes vivos, mortos e não responsivos até que o último verme morra.
Por fim, gere uma curva de sobrevivência para avaliar a viabilidade do hospedeiro ao longo do tempo.
Primeiro, selecione uma única colônia de cada uma das quatro cepas de Aeromonas e cultive-as de acordo com o protocolo de texto. Depois, meça a absorção OD600 do caldo bacteriano e ajuste até que a absorção seja igual a 2,0.
Em seguida, coloque e espalhe 30 microlitros de caldo bacteriano de cada cepa em placas NGM.
Selecione aleatoriamente e transfira os vermes L4 previamente preparados para as placas NGM com as cepas Aeromonas. Depois, incube as placas a 20 graus Celsius até que o ensaio seja concluído.
Todos os dias transfira todos os vermes vivos para uma nova placa NGM com bactérias. Conte o número de vermes vivos, mortos e sensores todos os dias até que o último verme esteja morto.