Detecção de Metabólitos Fecais Humanos usando um Biossensor Bacteriano

Comece com uma cultura de biossensor bacteriano suspensa em um meio.

Essas bactérias modificadas produzem um fator de transcrição que, ao se ligar a um metabólito fecal específico, ativa um promotor associado a um gene repórter fluorescente.

A essa cultura, adicione uma amostra de fezes humanas filtrada contendo metabólitos, como o lactato, que estão envolvidos nas interações hospedeiro-microbioma.

Dilua essa mistura com um meio fresco para manter um volume de reação ideal.

Incubar sem tremer para imitar o ambiente do intestino humano.

Os metabólitos fecais se difundem para dentro da célula bacteriana e se ligam ao fator de transcrição.

Esse complexo se liga ao promotor e leva à expressão gênica do repórter e à produção de proteínas.

Misture a solução para distribuição uniforme, dilua-a em um tampão e analise-a usando citometria de fluxo.

À medida que as células bacterianas passam por um laser, a fluorescência emitida pelas proteínas repórteres confirma a presença do metabólito fecal específico.