Ensaio Microfluídico Baseado em Fagos para Detectar E. coli Viável em Amostras de Água

Comece com uma amostra de água contaminada que provavelmente contém coliformes fecais, incluindo E. coli.

Realize uma diluição serial em água destilada para reduzir a turbidez e a carga microbiana.

Misture a amostra diluída desejada com o meio nutritivo e coloque-a em um chip microfluídico.

Use filtração a vácuo para capturar bactérias em uma membrana dentro do canal serpentino do chip.

Adicione o meio nutritivo na câmara superior e incube para melhorar a recuperação bacteriana.

Substitua o meio por uma solução de fagos específicos de E. coli que carregam o gene da luciferase.

Incubar para permitir a infecção por fagos, onde o DNA do fago se replica, degrada o DNA hospedeiro e forma novos fagos além de produzir luciferase. Depois, as células infectadas se lisam para liberar a luciferase.

Aplique filtração a vácuo para transferir a luciferase para uma membrana de captura.

Adicione um substrato que reaja com a luciferase para gerar um sinal luminescente.

Usando um tubo fotomultiplicador, meça a luminescência, que é proporcional ao número de células viáveis de E. coli na amostra de água.