JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 1:36 min • January 30th, 2026
Pegue uma cultura aderente de macrófagos murinos.
Trate bem o teste com um buffer contendo Wnt5A, uma molécula sinalizadora, e o controle apenas com buffer.
Infeccione com um patógeno bacteriano e incube.
Nas células testadas, Wnt5A ativa uma cascata de sinalização que potencializa a reorganização do citoesqueleto para impulsionar a absorção bacteriana nos fagossomos, enquanto células controle que não possuem essa sinalização internalizam menos bactérias.
Lave para remover bactérias não internalizadas, depois incube com um meio contendo antibióticos para eliminar bactérias extracelulares remanescentes.
A sinalização Wnt5A prepara os fagossomos contendo bactérias para a fusão com lisossomos, o que permite a degradação bacteriana.
Algumas bactérias escapam rompendo fagolisossomosmos.
Nas células de controle, a maturação limitada do fagosomo leva a um aumento da fuga.
Colhe as células em pontos de tempo definidos. Adicione água destilada para induzir choque osmótico, lisando as células e liberando bactérias intracelulares.
Espalhe os lisados sobre placas de ágar e incube.
Conte colônias para avaliar o maior declínio bacteriano dependente do tempo em células tratadas com Wnt5A.