JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:12 min • February 26th, 2026
Comece com uma placa de meio de crescimento nematoide rica em nutrientes contendo um gramado da bactéria patogênica Aeromonas.
Transfira vermes C . elegans do estágio L4 que expressam GFP específico para o gramado bacteriano e incube.
Os vermes ingerem bactérias junto com nutrientes. Isso permite que as bactérias alcancem e colonizem o intestino.
Usando um sistema especializado de secreção, o Aeromonas entrega fatores de virulência nas células intestinais do verme.
Esses fatores de virulência se difundem para a parede do corpo, onde desregulam os músculos, causando danos estruturais e necrose.
Transfira as minhocas diariamente para uma placa nova com gramado bacteriano para manter a exposição contínua ao patógeno.
Coloque os vermes sobre um gel de agarose suplementado com um agente anestesiante para anestesiá-los, depois coloque uma capa de proteção.
Usando um filtro GFP, capture imagens de fluorescência em intervalos regulares.
A perda progressiva do sinal de GFP indica disrupção muscular em C. elegans, representando necrose muscular induzida por Aeromonas durante a interação hospedeiro-patógeno.
Após cultivar cepas de Aeromonas e ajustar a absorção conforme o protocolo de texto, localize e espalhe o caldo bacteriano nas placas NGM.
Depois disso, transfira 50 vermes L4 para cada placa NGM. A cada 24 horas, transfira os vermes para placas NGM frescas. Selecione aleatoriamente 10 vermes e transfira-os para um gel de agarose 2% em meio M9 em uma lâmina.
Por fim, posicione um slip de cobertura no gel e capture imagens musculares com um filtro de proteína fluorescente verde em um microscópio fluorescente equipado com câmera.