JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:11 min • February 26th, 2026
Pegue dois pratos contendo matrizes de alginato impressas em 3D, cada um encapsulando cepas bacterianas de controle ou teste.
Ambas as cepas expressam constitutivamente uma proteína fluorescente para visualização. A cepa de teste também contém um gene induzível para produzir fibras extracelulares proteicas chamadas fibras curli.
Os padrões são impressos em um meio sólido suplementado com cálcio e rhamnose.
Incubar para permitir que íons de cálcio entrecruzem o alginato, formando um hidrogel.
Na cepa testada, a ramnose induz a produção de subunidades de curli, que se auto-montam na superfície celular em fibras.
Use um scanner fluorescente para capturar os padrões.
Trate com uma solução quelante de cálcio e incube com agitação para sequestrar íons de cálcio, o que interrompe a ligação cruzada de alginato e dissolve o hidrogel.
Descarte a solução e reimagine os padrões.
O tratamento fez com que o padrão controle se dissolvesse, enquanto o padrão de teste permaneceu intacto devido à rede estabilizadora de fibras do curli.
Incube as amostras impressas em temperatura ambiente por três a seis dias para permitir a produção dos componentes do biofilme, como fibras de curli.
Depois, coloque a placa em um scanner fluorescente e fotografe as placas.
Para dissolver a matriz de alginato, adicione 20 mililitros de uma solução de citrato de sódio de 0,5 molar a pH 7 ao substrato impresso, incube a placa em temperatura ambiente por duas horas enquanto agita a 30 rpm.
Depois, descarte o líquido e fotografe as placas novamente, para comparar com as imagens das placas antes e depois do tratamento com citrato.