Realização de Cromatografia em Camadas Finas para Avaliar a Degradação de Exopolissacarídeos Bacterianos

Comece com supernadantes fermentados contendo exopolissacarídeos degradados e não degradados, ou EPS.

Esses EPS são obtidos durante a fermentação, onde populações bacterianas fecais distintas em cada supernadante atuam de forma diferente sobre o EPS.

Observe os supernadantes próximos à base de uma placa cromatografia de camada fina pré-revestida com uma fase polar estacionária.

Seca a placa ao ar, depois coloque-a em uma câmara contendo uma fase móvel com polaridade menor que a fase estacionária.

À medida que a fase móvel sobe, os EPS migram de acordo com sua polaridade e tamanho.

Grandes EPS não degradados interagem fortemente com a fase estacionária e permanecem próximos à origem.

Fragmentos degradados menores se ligam fracamente e migram para cima com a fase móvel.

Remova o prato e seque ao ar.

Mergulhe a placa em um reagente que mancha carboidratos e que reage com EPS.

Seque a placa ao ar, depois aqueça para desidratar o EPS e formar faixas coloridas.

Uma única faixa próxima à origem confirma EPS não degradado, enquanto múltiplas bandas confirmam a degradação do EPS por bactérias.

Coloque 0,2 microlitros dos supernadantes fermentados em cada placa de alumínio 60 TLC de gel de sílica pré-r