Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:23 min. • March 31st, 2026
Comece com supernadantes fermentados contendo exopolissacarídeos degradados e não degradados, ou EPS.
Esses EPS são obtidos durante a fermentação, onde populações bacterianas fecais distintas em cada supernadante atuam de forma diferente sobre o EPS.
Observe os supernadantes próximos à base de uma placa cromatografia de camada fina pré-revestida com uma fase polar estacionária.
Seca a placa ao ar, depois coloque-a em uma câmara contendo uma fase móvel com polaridade menor que a fase estacionária.
À medida que a fase móvel sobe, os EPS migram de acordo com sua polaridade e tamanho.
Grandes EPS não degradados interagem fortemente com a fase estacionária e permanecem próximos à origem.
Fragmentos degradados menores se ligam fracamente e migram para cima com a fase móvel.
Remova o prato e seque ao ar.
Mergulhe a placa em um reagente que mancha carboidratos e que reage com EPS.
Seque a placa ao ar, depois aqueça para desidratar o EPS e formar faixas coloridas.
Uma única faixa próxima à origem confirma EPS não degradado, enquanto múltiplas bandas confirmam a degradação do EPS por bactérias.
Coloque 0,2 microlitros dos supernadantes fermentados em cada placa de alumínio 60 TLC de gel de sílica pré-revestida e faça girar para espalhar. Depois, use um secador de cabelo com ar quente para secar.
Imerga uma extremidade das placas amostradas em 20 mililitros de solução de ácido fórmico:n-butanol:água por vários minutos, até que a eletroforese se estenda quase até a outra extremidade. Depois, retire as placas com pinça e seque com secador de cabelo. Depois, deixe as placas de molho no reagente de orcinol por dois minutos para tingir e secar novamente.
Transfira os pratos para um forno de assar a 120 graus Celsius para aquecer por três minutos. Depois, tire fotos da placa para avaliar a degradação do EPS medindo as bandas de TLC.