Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:46 min. • February 26th, 2026
Comece pelo sobrenadante produzido pela microbiota intestinal humana durante a fermentação in vitro de exopolissacarídeos. O sobrenadante contém ácidos graxos de cadeia curta desprotonados (SCFAs) e outros metabólitos.
Adicione ácido metafosfórico para baixar o pH do sobrenadante e o vórtice para misturar completamente. Isso converte os SCFAs em suas formas protonadas, adequadas para análise de cromatografia gasosa.
Centrifugar para separar os detritos e coletar o sobrenadante contendo SCFAs e outros metabólitos.
Filtre o sobrenadante para eliminar resíduos residuais e evitar interferência na cromatografia.
Em um sistema de cromatografia gasosa de alto desempenho, injete o sobrenadante na entrada aquecida para vaporizá-lo. Depois, misture o vapor com um gás inerte e o faça passar por uma coluna polar de fase estacionária para separação.
Os SCFAs interagem com a fase estacionária da coluna e se separam com base em sua volatilidade, com ácidos de cadeia mais curta eluindo antes dos mais longos.
Identifique as concentrações de diferentes SCFAs comparando os resultados com padrões internos. Isso reflete a degradação microbiana dos exopolissacarídeos em condições semelhantes ao intestino
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