Imagem em lapso de tempo da segregação cromossômica em bactérias marcadas fluorescentemente

Comece com uma base de agarose rica em nutrientes em uma estrutura metálica contendo bactérias que expressam origens cromossômicas marcadas fluorescentes e microsferas fluorescentes.

A almofada de agarose suporta a fixação e mobilidade bacteriana, e microsferas fluorescentes servem como referência para rastrear a segregação cromossômica.

Adicione óleo de imersão à lente objetiva na câmara de incubação pré-aquecida de um microscópio de campo aberto invertido.

Coloque a amostra sobre a lente e então foque em uma região contendo múltiplas bactérias e pelo menos uma microsfera fluorescente.

Inicie imagens em time-lapse e capture imagens de contraste de fase e de fluorescência.

A origem de replicação marcada fluorescente aparece como um aglomerado brilhante próximo a uma extremidade da célula.

Durante a divisão, a origem duplica; um agrupamento permanece na extremidade original enquanto o outro agrupamento migra para a extremidade recém-formada da célula.

Esse sistema permite o acompanhamento da segregação cromossômica em múltiplas divisões e pode ser adaptado para visualizar processos dinâmicos semelhantes em outras bactérias, incluindo espécies patogênicas durante interações com hospedeiros.