Preparação do inóculo de Gardnerella vaginalis para modelar infecções urinárias recorrentes em camundongos

Faça um estoque de uma cepa resistente a antibióticos de G. vaginalis, uma bactéria anaeróbica associada a infecções urinárias em camundongos.

Durante uma infecção urinária inicial, a E. coli uropatogênica estabelece reservatórios quiescentes dentro das células epiteliais da bexiga.

A exposição subsequente a G. vaginalis desencadeia a eliminação de células superficiais mediada por toxinas, permitindo que UPEC dormente ressurgia e cause infecções urinárias recorrentes.

Para preparar o inoculum de G. vaginalis , estenda o caldo sobre uma placa de ágar nutritivo sem antibióticos para possibilitar a recuperação bacteriana.

Incubar anaeróbicamente para obter colônias em crescimento ativo.

Transfira um laço de colônias densas para um caldo de nutrientes sem antibióticos.

Incubar estaticamente sob condições anaeróbicas até atingir a concentração bacteriana desejada.

Meça a densidade óptica para estimar a concentração.

Transfira a suspensão para um tubo, centrifuge para pelletar as bactérias, descarte o sobrenadante e ressuspenda em um tampão.

Prepare diluições seriadas e place-as em meios contendo antibióticos para permitir o crescimento seletivo de G. vaginalis e evitar contaminação. Conte colôni