Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:51 min. • March 31st, 2026
Faça um estoque de uma cepa resistente a antibióticos de G. vaginalis, uma bactéria anaeróbica associada a infecções urinárias em camundongos.
Durante uma infecção urinária inicial, a E. coli uropatogênica estabelece reservatórios quiescentes dentro das células epiteliais da bexiga.
A exposição subsequente a G. vaginalis desencadeia a eliminação de células superficiais mediada por toxinas, permitindo que UPEC dormente ressurgia e cause infecções urinárias recorrentes.
Para preparar o inoculum de G. vaginalis , estenda o caldo sobre uma placa de ágar nutritivo sem antibióticos para possibilitar a recuperação bacteriana.
Incubar anaeróbicamente para obter colônias em crescimento ativo.
Transfira um laço de colônias densas para um caldo de nutrientes sem antibióticos.
Incubar estaticamente sob condições anaeróbicas até atingir a concentração bacteriana desejada.
Meça a densidade óptica para estimar a concentração.
Transfira a suspensão para um tubo, centrifuge para pelletar as bactérias, descarte o sobrenadante e ressuspenda em um tampão.
Prepare diluições seriadas e place-as em meios contendo antibióticos para permitir o crescimento seletivo de G. vaginalis e evitar contaminação. Conte colônias para determinar a concentração do inoculo.
Comece ciclando o G. Tensão vaginal de um caldo congelador a menos 80 graus Celsius para uma câmara anaeróbia. Estrie as bactérias em uma placa NYCIII sem antibióticos. Incube a placa anaerobia a 37 graus Celsius por 24 horas.
Na câmara anaeróbica, inocule cinco mililitros de meio anaeróbico NYCIII com um laço de um micrôlitro cheio de células da placa NYCIII, e incube a cultura estaticamente a 37 graus Celsius sob condições anaeróbicas por 18 horas. Não inclua antibióticos no meio de crescimento. Determine o OD600 da cultura usando um espectrofotômetro.
Depois, centrifuge-a a 9.600 vezes g por um minuto e aspire o meio. Ressuspenda o pellet bacteriano no PBS até a concentração desejada e dilua e placue o inóculo em série em série.