Why does null hypothesis testing matter for colonoid barrier validation?

Null hypothesis testing enables objective assessment of whether observed barrier function changes are statistically significant, supporting robust target validation and reducing false positives in early discovery.

How does independent variable isolation fit in colonoid monolayer studies?

Isolating variables such as differentiation inhibitors or pathogen exposure allows precise attribution of effects on epithelial barrier integrity, strengthening mechanistic insights and discovery pipeline confidence.

What do quantitative tight junction measurements enable in screening?

Quantitative assessment of tight junction formation provides actionable data for comparing compound effects, enabling reliable screening and prioritization of candidates that modulate barrier properties.

Why are replication requirements critical for cross-functional colonoid workflows?

Replication ensures reproducibility and comparability of barrier function data across teams, facilitating collaborative decision-making and reducing risk of irreproducible findings in portfolio advancement.

What statistical analysis is required before implementing barrier function assays?

Statistical analysis of barrier integrity outputs, such as tight junction quantification, is essential to validate assay performance and support data-driven go/no-go decisions in R&D workflows.

Geração de uma monocamada colonoide humana com função barreira para estudar as interações hospedeiro-patógeno

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

0 views • 2:04 min • February 26th, 2026

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Comece com uma placa de múltiplos poços contendo um inserto de poço revestido com colágeno.

Adicione um meio de expansão ao poço.

Os nutrientes do meio promovem a proliferação celular, enquanto os inibidores de diferenciação mantêm um estado semelhante ao do caule.

Adicione uma suspensão de agrupamentos celulares epiteliais derivados de culturas de células-tronco do cólon ao poço, insera e incube.

As células aderem à superfície revestida de colágeno e recebem nutrientes tanto do compartimento superior quanto do inferior.

Os inibidores previnem a diferenciação celular e facilitam a proliferação dos agrupamentos celulares.

Usando um microscópio de contraste de fase, observe a cultura.

Uma vez formada a monocamada, substitua o meio de cultivo por meio fresco, sem inibidores de diferenciação celular.

Isso facilita a diferenciação das células em células epiteliais do cólon maduras com junções apertadas.

Essas células secretam muco e desenvolvem uma monocamada funcional que imita a barreira fisiológica intestinal para estudos de interação hospedeiro-patógeno.

Pipete 600 microlitros de meio de expansão no espaço abaixo de cada inserção. Pipete 100 microlitros de suspensão celular do frasco para cada inserção.

Retorne a placa à incubadora de cultura de tecidos e deixe intocada por pelo menos 12 horas. Evite sacudir ou inclinar o prato bruscamente. Após a incubação, coloque a placa em um microscópio de luz com contraste de fase com uma lente objetiva de 2,5 a 10 vezes.

Renove com meio de cultura sem inibidores para interromper o tratamento de inibição. Continue renovando o meio a cada dois a três dias até o confluente.