Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:42 min. • February 26th, 2026
Observe uma cultura de Streptococcus do Grupo B, ou GBS, um patógeno bacteriano oportunista.
Dilua a cultura em meio fresco e incube para obter bactérias que se dividem ativamente.
Transfira a cultura para um tubo cônico.
Centrifuge para pelletar as bactérias e depois descarte o sobrenadante.
Lave as bactérias com tampão.
Centrifuge novamente, remova o sobrenadante e ressuspenda as bactérias no tampão.
Em seguida, use uma fêmea de camundongo tratada com hormônios e epitélio vaginal preparado, mais suscetível a infecções.
Prenda o rato. Usando uma ponta fina de pipeta, dispense a suspensão de GBS no lúmen vaginal.
Solte o rato, levante o rabo e deixe as patas dianteiras andarem sobre uma superfície firme.
Isso promove a retenção do inóculo no lúmen vaginal, possibilitando a adesão ao GBS.
Inspecione a abertura vaginal para detectar o retorno do inóculo.
As bactérias aderidas colonizam a superfície epitelial vaginal e estabelecem uma infecção.
O modelo de camundongo com infecção vaginal está pronto para estudos adicionais.
No mesmo dia da injeção, cultive uma cultura líquida de cinco mililitros durante a noite da cepa GBS de interesse no caldo Todd Hewitt, ou THB, a 37 graus Celsius.
Na manhã seguinte, subcultura do GBS em um volume de 1 a 10 em THB fresco para uma incubação de duas a três horas a 37 graus Celsius, até que as bactérias atinjam a fase média do log. Depois, transferir a subcultura para um tubo cônico estéril de 15 mililitros e centrifugar as células bacterianas. Resuspenda o pellet em 200 microlitros de PBS estéril.
Depois, aumente o volume total da suspensão para 1 mililitro de PBS por 10 camundongos, para atingir um OD600 de 0,4 em um novo tubo de cultura de 5 mililitros. Transfira a cultura para um novo tubo de 15 mililitros e refaça a granulação das bactérias. Depois, resuspenda as células em PBS a um décimo do volume original.
Reserve 50 microlitros da bactéria para diluição serial e placagem no THB agar, para determinar a CFU exata do inóculo. Depois, retirar 10 microlitros de GBS em uma ponta de pipeta de 200 microlitros com carregamento em gel e fixar manualmente a pele solta na nuca do pescoço do primeiro animal entre o polegar e o indicador, seguida pela imobilização da cauda. Insira a ponta da pipeta de 5 a 10 milímetros no lúmen vaginal e dispense todo o volume do inóculo.
Depois, solte imediatamente a barba e levante a cauda para elevar a parte traseira do animal, enquanto caminha as patas dianteiras sobre uma superfície dura. Após um minuto, inspecione visualmente a abertura vaginal para detectar qualquer retorno do inóculo.