Quantificação da Supressão de Biofilme Induzida por Enzimas em Bactérias Patógenas

Pegue uma microplaca contendo poços de controle e tratamento, cada um inoculado com uma bactéria patogênica formadora de biofilmes.

Os poços de tratamento contêm uma enzima que interrompe a formação de biofilmes.

Incubar sob condições microanaeróbicas para criar um ambiente com baixo teor de oxigênio. Isso promove a secreção de moléculas de sinalização bacteriana que mediam a adesão da superfície. Nos poços de tratamento, a enzima degrada essas moléculas, reduzindo assim a ligação bacteriana.

Lave os poços para remover células não aderentes.

Introduza um meio fresco e incube. As bactérias aderidas proliferam e secretam substâncias poliméricas extracelulares, que formam a matriz de biofilmes.

Remova o meio e lave os poços.

Adicione um corante catiônico e incube para permitir a ligação a componentes de biofilme carregados negativamente.

Lave para remover o corante que não está ligado.

Incube com um solvente sob agitação para liberar o corante ligado na solução.

Meça a densidade óptica ou OD para quantificar a biomassa do biofilme.

A menor OD nos poços de tratamento reflete a redução da formação de biofilmes, resultante da adesão celular inicial comprometida.

Para começar, cultive uma cultura de