Avaliação Microscópica da Inibição Mediada por Enzimas na Formação de Biofilmes

Comece com dois micro-pratos de fundo de vidro contendo suspensões de uma bactéria formadora de biofilmes.

O prato de tratamento contém uma enzima ativa que perturba a sinalização, enquanto o controle inclui a enzima inativada.

Cubra os pratos e incube para permitir a adesão bacteriana à superfície do microprato.

Lave para remover células não aderentes, depois introduza um meio fresco contendo as enzimas e incube.

No prato de controle, as bactérias se comunicam por meio de moléculas sinalizadoras e produzem substâncias poliméricas extracelulares (EPS), formando um biofilme.

A enzima ativa degrada as moléculas sinalizadoras, prejudicando sua função e reduzindo a formação de biofilmes.

Reabasteça com meio fresco e incube ainda mais para reforçar os efeitos disruptivos do biofilme da enzima.

Remova o meio, adicione lectinas marcadas com fluorescência e incube para permitir a ligação da lectina ao EPS.

Lave para remover qualquer lectina solta.

Incube com um fixador para preservar a arquitetura do biofilme, depois enxágue o prato.

Adquira imagens de microscopia confocal para avaliar a supressão mediada por enzimas da formação de biofilmes.

Para realizar microscopia de varredura a laser confocal, o