Detecção de sacaribactérias em cultura binária usando reação em cadeia da polimerase
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:06 min. • February 26th, 2026
Comece com uma cultura de Actinomyces infectada por Saccharibacteria.
As sacaribactérias, uma bactéria parasita ultrapequena, e seu hospedeiro formam uma cultura binária.
Adicione uma aliquota da cultura infectada a um tubo de PCR contendo reagentes de amplificação com corante de rastreamento de eletroforese e primers específicos para Saccharibacteria.
Coloque o tubo em um termociclador com condições de PCR definidas.
Durante a desnaturação inicial, o calor lisa Saccharibacteria, liberando DNA genômico. Os actinomyces permanecem intactos devido às paredes celulares rígidas, limitando a liberação do DNA do hospedeiro.
O calor então desnatura as cadeias de DNA das Saccharibacterias e ativa a polimerase Taq.
Durante o recozimento, os espoletas se ligam a sequências complementares no genoma de Saccharibacteria.
Em extensão, a Taq polimerase adiciona dNTPs aos primers, sintetizando novas fitas de DNA.
Coloque o produto de PCR amplificado em um gel de agarose pré-tingido com um corante que se liga aos fragmentos de DNA.
Faça eletroforese e visualize o gel sob luz UV.
Uma faixa de amplicão específica para Saccharibacteria confirma a interação hospedeiro-parasita na cultura binária.
Aliquota 24 micro
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