Avaliação do papel da imunidade do hospedeiro na infecção por micobactérias usando um modelo de peixe-zebra

Pegue peixes-zebra selvagens anestesiados e peixes-zebra imunocomprometidos que não têm linfócitos.

Coloque cada peixe com o lado ventral para cima em uma fenda esculpida em uma esponja úmida para manter a viabilidade.

Injetar Mycobacterium marinum na cavidade abdominal para estabelecer uma infecção sistêmica que modele a tuberculose humana.

Após a injeção, transfira os peixes para água doce do aquário para recuperação e monitore-os.

Nos peixes do tipo selvagem, uma resposta inflamatória forma um granuloma composto por bactérias, macrófagos infectados e linfócitos. O granuloma contém as bactérias, impedindo sua propagação.

Linfócitos secretam citocinas que reforçam a função antimicrobiana dos macrófagos, permitindo a eliminação bacteriana.

Nos peixes imunocomprometidos, o granuloma não possui linfócitos. Como resultado, os macrófagos permanecem parcialmente ativados, permitindo que as bactérias sobrevivam, se repliquem e se espalhem, resultando na mortalidade dos peixes.

Gere um gráfico de sobrevivência. A alta mortalidade em peixes imunocomprometidos destaca o papel dos linfócitos no controle da infecção.

Primeiro, pipete uma gota de 5 microlitros da solução bacteriana diluída sobre um pedaço de filme de parafina. Depois, puxe a gotícula para uma agulha de insulina calibre 30.

Use um peixe de cinco a oito meses para este experimento, sendo um peixe selvagem e o outro um peixe mutante de trapos. Posicione esses peixes com o lado ventral para cima nas fendas de um pedaço de plástico úmido e espumado. Injete a agulha de insulina entre as nadadeiras pélvicas em um ângulo de 45 graus.

Mantenha a agulha aberta para cima para garantir que toda a abertura esteja dentro da cavidade abdominal. Depois, injete lentamente a solução bacteriana. Depois disso, remova cuidadosamente a agulha e imediatamente transfira o peixe para um aquário de recuperação cheio de água fresca.

Pegue amostras da alíquota bacteriana em uso a cada 15 minutos em placas 7H10. Incube essas amostras a 29 graus Celsius por cinco dias para verificar a dose de infecção. Verifique o bem-estar dos peixes regularmente, certificando-se de eutanasiar qualquer peixe com sintomas de infecção, incubando-os em água com mais de 0,02% de éster etílico do ácido 3-aminobenzoico.