Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:36 min. • February 26th, 2026
Pegue um tubo com papel de filtro contendo Listeria monocytogenes. Essas bactérias são coletadas de macrófagos murinos infectados.
Adicione um tampão contendo inibidores de RNase para evitar a degradação do RNA, depois faça um vórtice no tubo em vários ângulos para desalojar as bactérias.
Centrifuge e transfira a suspensão para um tubo contendo uma mistura de fenol–clorofórmio–detergente.
O vórtice e incuba em temperatura elevada para desintegrar as membranas bacterianas, inativar proteínas e lisar as bactérias, liberando componentes intracelulares.
Centrífuga para separar a fase aquosa rica em RNA dos outros componentes.
Colete o RNA e transfira-o para um tubo contendo acetato de sódio e etanol.
Vórtice, depois incubar em baixa temperatura.
O acetato de sódio neutraliza a carga negativa do RNA, enquanto o etanol e as condições frias promovem a precipitação do RNA.
Centrífuga para pelletar o RNA.
Remova o sobrenadante e lave o pellet com etanol frio.
Centrifuge novamente, remova o sobrenadante, seque ao ar e adicione água livre de RNase.
Armazene o RNA para análise posterior.
Descongele os tubos que contêm os filtros em gelo para mantê-los frios. Depois, adicione 650 microlitros de acetato fri
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