Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:18 min. • March 31st, 2026
Comece com uma placa de cultura contendo colônias isoladas de uma bactéria do solo.
Retire e inocule uma colônia em um frasco de cultura com defleitor contendo um meio nutritivo.
Incube a cultura com o shaking.
O frasco com defletor possui cristas internas que aumentam a turbulência durante o sacudir, aumentando a aeração.
Esse processo garante uma distribuição uniforme de oxigênio e previne aglomeração e sedimentação celular, permitindo uma dispersão uniforme dos nutrientes.
As bactérias proliferam rapidamente, formando uma suspensão densa com células que exibem características fisiológicas uniformes.
Em intervalos regulares, colete uma amostra em uma cubeta.
Usando um espectrofotômetro, passe a luz através da amostra. A quantidade de luz transmitida é medida para quantificar o crescimento bacteriano, conhecido como densidade óptica ou OD.
Selecione culturas bacterianas na fase exponencial a estacionária inicial, já que as células neste estágio são altamente metabolicamente ativas e, portanto, mais suscetíveis à infecção eficiente por bacteriófagos.
As células de artrobacter são cultivadas a partir de colônias estriadas em uma placa de ágar LB, incubadas a 30 graus Celsius por dois a três dias.
Use um laço estéril para escolher uma colônia e adicione a 50 mililitros de caldo LB em um frasco de cultura com defletores. Incube o frasco em uma incubadora agitada a 225 rpm a 30 graus Celsius por aproximadamente 24 horas para obter células de fase exponencial ou estacionária inicial para experimentos de infecção por fagos.
Monitore de perto o estado do crescimento bacteriano para evitar que as células entrem no estado médio a tardio estacionário. O ODideal 600 para isolamento de fagos está entre 0,5 e 0,7.