Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:06 min. • March 31st, 2026
Comece com uma bexiga de camundongo imobilizada e dissecada, pré-infectada com E. coli uropatogênico que expressa β-galactosidase, colocada em uma placa multi-poço revestida de silicone.
O lúmen da bexiga fica voltado para cima, expondo as células epiteliais que contêm comunidades bacterianas intracelulares, ou IBCs.
Lave a bexiga com um tampão para remover detritos e bactérias soltas.
Em seguida, adicione um fixador e incube para preservar as estruturas celulares e bacterianas.
Remova o fixador e lave com um buffer.
Depois, lave com um tampão contendo detergente para permeabilizar as membranas celulares e bacterianas.
Remova o tampão, depois adicione uma solução de X-gal, um substrato de β-galactosidase, suplementada com reagentes redox, e incube.
Reagentes X-gal e redox entram na bactéria. β-galactosidase cliva X-gal, produzindo um intermediário incolor que é oxidado por reagentes redox para formar um precipitado azul.
Sob um microscópio de dissecação, os pontos azuis na bexiga confirmam os IBCs, indicando uma infecção do trato urinário.
Para a enumeração IBC, após colher a bexiga, coloque-a em um poço revestido de silicone de uma placa de 6 poços com PBS e use tesoura para cortá-la ao me
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