JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:40 min • March 31st, 2026
Comece com um camundongo anestesiado com uma tampa de placa de Petri colocada sob o abdômen para manter as costas na horizontal.
O camundongo apresenta uma queimadura nas costas que foi infectada com Acinetobacter baumannii, um patógeno bacteriano Gram-negativo.
As bactérias são geneticamente modificadas para carregar um operon de bioluminescência.
Posicione o rato dentro de uma câmara de imagem de bioluminescência mantida em temperatura ideal e comece a fazer a imagem.
No local da infecção, os genes luxA e luxB do operon de bioluminescência codificam a enzima luciferase. Os genes luxCDE codificam enzimas que sintetizam o substrato da luciferase.
A luciferase catalisa a oxidação do substrato e produz luz visível, tornando as bactérias luminescentes.
O sinal de bioluminescência indica a presença de bactérias metabolicamente ativas no local da ferida.
Usando softwares de imagem, quantifique a intensidade do sinal de bioluminescência para estimar a carga bacteriana viável.
Imediatamente após a inoculação, realize a imagem bioluminescente iniciando o software de imagem ao vivo. No painel de controle, clique em Inicializar. Depois, espere até que a cor da caixa de temperatura fique verde, indicando que a temperatura do estágio na câmara da amostra atingiu 37 graus Celsius.
Coloque o camundongo anestesiado no palco quente da câmara da amostra com as queimaduras infectadas diretamente sob a câmera. Em seguida, no painel de controle, marque ao lado de "Luminescência".
Depois, selecione "Exposição automática" para que o tempo de exposição para a imagem seja otimizado pelo software de imagem ao vivo com base na intensidade da bioluminescência. Selecione "C" na lista suspensa "Campo de Visão". Selecione a opção de varredura média para deixar o software determinar a distância focal.
Depois coloque um seletor ao lado da sobreposição. Agora, clique em "Adquirir" para capturar a imagem. Depois, na caixa "Editar Etiqueta da Imagem", clique em ok. Uma "Janela de Imagens" e uma "Paleta de Pedágio" aparecerão. Defina os parâmetros de Auto-ROI para auto-seleção.