Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:47 min. • March 31st, 2026
Comece com uma lâmina perfurada no microscópio e coloque uma biópsia circular de tecido sobre a área perfurada.
Em seguida, coloque uma junta de borracha sobre ela.
Vire e insira esse conjunto na seção inferior da estrutura metálica da câmara de perfusão.
Alinhe a estrutura de cima com a de baixo e prenda-os.
Use um calibre para confirmar a altura uniforme da câmara.
A câmara é conectada a uma bomba, que por sua vez está conectada a um reservatório contendo bactérias suspensas em um tampão.
Inicie a perfusão da suspensão bacteriana na câmara.
A perfuração central na lâmina permite a entrada da suspensão bacteriana no conjunto.
Isso possibilita a interação entre as bactérias e a superfície do tecido, promovendo adesão e colonização.
Essa configuração gera um modelo in vitro que imita a colonização bacteriana in vivo no tecido.
Para iniciar o protocolo, coloque uma biópsia de tecido previamente preparada com 10 milímetros de diâmetro, com a mesma espessura entre uma lâmina de microscópio e uma perfuração circular de oito milímetros, e uma junta de borracha com a superfície interna voltada para cima, para contato com a suspensão bacteriana.
Foque na orientação do enxerto de tecido enquanto estiver colocado no suporte. Certifique-se de que a superfície interna do tecido já esteja exposta à corrente sanguínea voltada para cima para entrar em contato com o meio experimental.
Em seguida, insira seu suporte com o papel de papel na chapa de junta embutida na estrutura metálica inferior da câmara.
Fixe a estrutura metálica superior com a chapa de junta correspondente na parte inferior da câmara com o suporte de papel previamente inserido. Depois, monte toda a câmara com oito parafusos e porcas de parafuso. Certifique-se de que a altura da câmara seja sempre a mesma entre enxertos usando um calibre ou régua.
Em seguida, conecte a câmara de fluxo com uma bomba peristáltica. Depois, conecte o reservatório de fluido de 400 mililitros com os tubos. Perfunda os tecidos com suspensões de 100 mililitros de dez para as sete unidades formadoras de colônias marcadas fluorescentemente em soro tampão fosfato, com o estresse de três dines por centímetro quadrado e a taxa de fluxo correspondente de quatro mililitros por minuto durante uma hora, usando a bomba peristáltica e o reservatório bacteriano. Recircule continuamente a suspensão bacteriana de 100 mililitros usando o mesmo reservatório de coleta.