JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:15 min • March 31st, 2026
Comece com mudas de milho crescendo sob condições controladas para servir como hospedeiro.
Em seguida, veja Agrobacterium tumefaciens, uma bactéria patogênica de plantas.
As bactérias modificadas carregam um construto de T-DNA que codifica um genoma viral recombinante. Esse genoma contém um fragmento genético inserido projetado para silenciar um gene de milho-alvo.
Injete as bactérias logo acima do gânglio coleoptilar, o nódulo mais baixo da planta, até que a suspensão preencha o coleóptilo, garantindo a entrega aos tecidos internos.
No local de injeção, as bactérias transferem o T-DNA que transporta o genoma viral para as células do milho, onde ele é transcrito em RNA viral que se move para o citoplasma.
O RNA se replica e desencadeia a produção de proteínas virais, formando novas partículas virais que se espalham sistematicamente para estabelecer a infecção.
O RNA viral que carrega o fragmento gene desejado ativa a maquinaria de interferência de RNA da planta, degradando mRNAs específicos do milho e silenciando o gene alvo.
Isso resulta em alterações visíveis nos fenótipos regulados pelo gene-alvo à medida que as plantas infectadas crescem, como a formação de lesões necróticas, confirmando o silêncio gênico bem-sucedido.
Use mudas de milho de 4 a 7 dias para injetar Agrobacterium. Monte a seringa e a agulha. Injete suavemente a suspensão bacteriana 2-3 milímetros acima do gânglio coleoptilular até que ela preencha o coleoptil, ou fique visível no torcilo, dependendo do estágio de crescimento das plantas.
Injete todas as mudas e troque a seringa e as agulhas para injetar cada construção. Confirme a infecção fenotípica observando lesões que resultam do silenciamento dos genes de controle, mimetiz da lesão 22 ou fitoeno desaturase nas folhas.