Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:30 min. • February 26th, 2026
Comece com placas de bioensaio, uma pré-colonizada no lado esquerdo do ágar nutritivo com Corynebacterium propinquum e a outra contendo ágar nutritivo sozinha.
Em seguida, pegue uma placa multipoço contendo suspensão patogênica de Staphylococcus .
Baixe um carimbo de inoculação nos poços, com suas pontas mergulhando na cultura Staphylococcus .
Gire o carimbo, depois levante-o e verifique se cada ponta carrega uma gota uniforme para garantir uma inoculação consistente.
Alinhe o carimbo com o lado direito da placa de bioensaio, evitando contato com as colônias existentes.
Remova o carimbo, deixando manchas do inoculo Staphylococcus no ágar.
Repita a estampagem apenas na placa de ágar para gerar uma monocultura. Incube as placas de cabeça para baixo.
Na cocultura, C. propinquum secreta sideróforos, pequenas moléculas que absorvem ferro do ágar, inibindo assim o crescimento de Staphylococcus .
Após a incubação, compare o crescimento de Staphylococcus na cocultura e na monocultura.
Inibição significativa na cocultura sugere interação entre as duas espécies.
Após a incubação de seis dias da placa de bioensaio, prepare culturas durante a noite do organismo-alvo conforme descrito anteriormente. Prepare a placa-alvo preenchendo cada poço de uma placa vazia de 12 poços com 1,8 mililitros de BHI e 200 microlitros da cultura alvo durante a noite. Coloque um carimbo de inoculação estéril na placa-alvo.
Gire suavemente as culturas ao redor dos poços, garantindo que não contaminem poços vizinhos. Levante o carimbo de inoculação e certifique-se de que haja uma gota de cultura alvo diluída em cada ponta do carimbo. Coloque o carimbo de inoculação em uma placa de bioensaio não inoculada e balance suavemente o carimbo para que a gota de cultura inocule cada poço.
Uma vez que o carimbo é removido, uma gota de cultura deve ser visível nos poços. Se algum poço não for inoculado com o carimbo de inoculação, coloque 3 microlitros de cultura diluída durante a noite nos poços usando uma pipeta. Depois, inocule as placas de bioensaio conforme descrito anteriormente, mas alinhe as pontas do carimbo com o lado direito da placa de 12 poços, garantindo que o carimbo não entre em contato com a colônia bacteriana existente. Remova cuidadosamente o carimbo e coloque-o de volta na placa de alvo.
Se o ágar tiver solidificado nos poços de forma desigual, balance suavemente o carimbo para frente e para trás, mas tome cuidado para não deslocar o carimbo para o crescimento do organismo testado.
Repita a inoculação para cada placa de bioensaio até que todas as placas estejam inoculadas, então incube as placas de cabeça para baixo na temperatura adequada por sete dias.
Após co-cultivar o teste e o organismo-alvo por uma semana, avalie as interações com base na avaliação visual. Pontuar os poços com o crescimento do organismo-alvo que apresenta crescimento indistinguível da monocultura como zero. Marque os poços com crescimento diminuído como um, e nenhum crescimento como dois.