Avaliação da colonização radicular de mudas de tomate por uma bactéria patogênica usando contagens celulares viáveis

Pegue vasos contendo mudas de tomate cultivadas em areia estéril.

As raízes das mudas são inoculadas com uma cepa selvagem produtora de celulose ou com uma cepa mutante deficiente em celulose de uma bactéria patogênica de plantas.

Remova o material selante de um recipiente, inverta-o sobre papel estéril e toque para liberar o cilindro de areia que contém a planta.

Divida o cilindro de areia no sentido do comprimento para expor a raiz.

Depois, mergulhe a raiz em um tampão estéril e agite para desalojar as bactérias frouxamente presas.

Repita o processo para a outra raiz.

Transfira as raízes lavadas para um novo tampão. Sonice-as para liberar bactérias aderidas firmemente.

Use essas suspensões sonicas para preparar diluições seriadas, place-as em ágar e incube para permitir que bactérias viáveis formem colônias.

Contagens viáveis mais altas na cepa do tipo selvagem, em comparação com o mutante deficiente em celulose, destacam o papel crítico das fibrilas de celulose na promoção da adesão bacteriana à superfície radicular.

Para determinar o número de bactérias viáveis encontradas em plantas cultivadas na areia, comece removendo o material selante do topo e do fundo do recipiente.

Coloque o recipiente sobre uma folha de papel estéril e bata suavemente o recipiente contra a superfície para soltar a areia antes de levantar delicadamente a areia junto com a planta do vaso.

Quando o cilindro de areia e a planta estiverem livres sobre o papel, corte a areia ao meio para revelar a raiz da planta. Se desejar, retire amostras da areia perto da borda do recipiente, assim como perto da raiz. Isso pode ser útil para determinar a disseminação, acúmulo e crescimento de bactérias.

Pegue a raiz e remova a areia e as bactérias que estão frouxamente aderidas, mergulhando a raiz em um volume medido de água ou tampão e sacudindo suavemente. Determine a contagem celular viável das bactérias na suspensão resultante, cobrindo-a em meio adequado, como o ágar Luria. Isso representa o número de bactérias vagamente associadas à raiz. Por fim, remova as bactérias fortemente ligadas por sonicação e determine seu número.