Formação de Grânulos de Estresse durante a infecção por Shigella em células epiteliais cancerígenas

Comece com uma placa multipoço contendo células epiteliais cancerígenas aderentes em um revestimento de cobertura.

Adicione a Shigella flexneri, uma bactéria patogênica.

Centrifuge a placa para promover o contato bacteriano com as células e então incube.

Usando um sistema especializado de secreção, Shigella injeta proteínas de virulência nas células epiteliais.

Essas proteínas de virulência modulam o sistema de sinalização epitelial, facilitando a absorção bacteriana.

Dentro das células, as bactérias continuam secretando proteínas de virulência, que interrompem a tradução celular e acumulam mRNAs não traduzidos.

Proteínas de ligação e sinalização de RNA se agregam com os mRNAs não traduzidos, formando grânulos citoplasmáticos sem membrana conhecidos como grânulos de estresse.

Descarte o substrato e lave para remover bactérias soltas.

Em seguida, adicione substrato de cultura pré-aquecido suplementado com gentamicina para eliminar bactérias presas à superfície.

Adicione um fixador para preservar estruturas celulares e grânulos de estresse.

Descarte o fixador e lave com uma sacudida suave para remover o fixador residual.

As células estão prontas para coloração por imunofluorescência para visual