Imagem por fluorescência da colonização bacteriana em tecido renal de camundongos

Comece com um rim de camundongo infectado com bactérias Gram-positivas modificadas que colonizam o tecido e formam lesões.

Todas as células bacterianas expressam fluorescência vermelha, enquanto condições específicas de lesão permitem a expressão de proteínas fluorescentes verdes em células específicas.

Trate o rim com um fixador e incube no escuro para preservar a estrutura do tecido e permeabilizar parcialmente as membranas celulares.

Infundi o órgão em um meio adequado, congele-o e divida-o em fatias finas de tecido.

Coloque a fatia sobre uma lâmina de vidro carregada para que fique aderente.

Tinga o tecido com um corante nuclear.

O corante penetra nas células do hospedeiro e bacterianas e se liga ao DNA.

Coloque uma cobertura sobre o tecido e observe a lâmina sob um microscópio de fluorescência usando canais de imagem específicos.

A coloração nuclear delimita o DNA hospedeiro e bacteriano.

Todas as bactérias no tecido expressam fluorescência vermelha, enquanto a expressão de fluorescência verde indica o local da interação hospedeiro-patógeno.

No ponto experimental apropriado, colhe rim, coração, fígado, pulmões e baço em tubos de polipropileno de 15 mililitros contendo 10% de formalina t