Imunocoloração de microlesões preenchidas com bactérias em uma seção de tecido cardíaco de camundongo para imagem

Comece com uma lâmina contendo uma seção de tecido cardíaco fixada quimicamente de um camundongo infectado com Streptococcus pneumoniae, uma bactéria patogênica.

Essa infecção causa a formação de microlesões extracelulares e cheias de bactérias nos músculos cardíacos.

Lave a seção com um buffer para remover qualquer fixador residual.

Aplique um detergente não iônico para permeabilizar as membranas celulares do hospedeiro.

Lave novamente para eliminar qualquer detergente restante.

Incube a seção com um agente bloqueante para bloquear os sítios de ligação inespecíficos.

Enxágue para remover o agente bloqueante não ligado.

Introduza um anticorpo primário que se liga ao polissacarídeo capsular da bactéria.

Lave para remover qualquer anticorpo não ligado, depois adicione um anticorpo secundário verde marcado com fluoróforo que se liga ao anticorpo primário.

Contra-tinga com um corante nuclear para marcar os núcleos da célula hospedeira.

Lave a seção e monte usando um meio de montagem.

Observe a seção usando microscopia confocal para visualizar as bactérias marcadas dentro das microlesões.

Usando uma seção cardíaca de 5 micrômetros em lâminas de vidro carregadas positivamente, primeiro congele as se