Imunocoloração de microlesões preenchidas com bactérias em uma seção de tecido cardíaco de camundongo para imagem

0 vistas3:02 min • February 26th, 2026

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Comece com uma lâmina contendo uma seção de tecido cardíaco fixada quimicamente de um camundongo infectado com Streptococcus pneumoniae, uma bactéria patogênica.

Essa infecção causa a formação de microlesões extracelulares e cheias de bactérias nos músculos cardíacos.

Lave a seção com um buffer para remover qualquer fixador residual.

Aplique um detergente não iônico para permeabilizar as membranas celulares do hospedeiro.

Lave novamente para eliminar qualquer detergente restante.

Incube a seção com um agente bloqueante para bloquear os sítios de ligação inespecíficos.

Enxágue para remover o agente bloqueante não ligado.

Introduza um anticorpo primário que se liga ao polissacarídeo capsular da bactéria.

Lave para remover qualquer anticorpo não ligado, depois adicione um anticorpo secundário verde marcado com fluoróforo que se liga ao anticorpo primário.

Contra-tinga com um corante nuclear para marcar os núcleos da célula hospedeira.

Lave a seção e monte usando um meio de montagem.

Observe a seção usando microscopia confocal para visualizar as bactérias marcadas dentro das microlesões.

Usando uma seção cardíaca de 5 micrômetros em lâminas de vidro carregadas positivamente, primeiro congele as seções, depois descongele e deixe secar ao ar. Fixe as lâminas em formalina tamponada com 10% de neutro por 10 minutos a 25 graus Celsius. Depois, remova o fixador com três lavagens e faça PBS por cinco minutos por lavagem.

Em seguida, permeabiliza o tecido com 0,2% de Triton X-100 em PBS por 15 minutos. Remova o detergente com mais três lavagens em PBS puro. Depois, bloqueie o tecido com soro de cabra 10% em PBS por uma hora. Após um enxágue no PBS, cubra a seção com antissoro por duas horas a 37 graus Celsius. Trate controles negativos com antisoro de coelho ingênuo.

Como o tecido cardíaco absorve facilmente a coloração imunofluorescente XI, levando a altos níveis de fundo, a concentração no tempo de incubação para diferentes tipos de anticorpos provavelmente precisará ser otimizada.

Duas horas depois, lave o anti-soro com PBS. Depois, substitua a solução por um anticorpo secundário e deixe as lâminas incubarem a 37 graus Celsius por mais 30 minutos. Agora, aplique DAPI a 5 miligramas por mililitro e lave as lâminas com PBS. Por fim, monte as lâminas no FluorSave e fotografe-as com microscopia confocal.

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Última atualização: 15 agosto 2026