JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:25 min • March 31st, 2026
Coloque os tubos de reação em cadeia da polimerase ou PCR contendo comprimidos prontos para PCR, específicos para os patógenos alimentícios alvo, em um suporte refrigerado para tubos de PCR.
Cada comprimido inclui primers específicos para o alvo, DNA polimerase, dNTPs e um corante fluorescente usado na reação de PCR.
Adicione lisato de mosca enriquecido contendo uma grande quantidade de DNA de bactérias patogênicas para formar a mistura de reações.
Sele os tubos com tampas ópticas para evitar a evaporação.
Carregue os tubos de PCR no ciclador térmico e realize execuções de PCR separadas usando programas específicos para cada patógeno alvo.
Durante a PCR, o DNA se desnatura, os primers se ligam à sequência alvo, e a amplificação produz DNA de fita dupla que liga o corante e emite fluorescência.
Ciclos repetidos resultam em amplificação exponencial do DNA e aumento da fluorescência.
O instrumento acompanha a fluorescência em tempo real para detectar a presença dos patógenos alimenticios alvo na amostra.
Para iniciar a detecção baseada em PCR, primeiro, resfrie um rack de tubos de PCR em um bloco de resfriamento. Em seguida, coloque os tubos de PCR correspondentes contendo comprimidos prontos para PCR do patógeno alimentar alvo no suporte.
Remova cuidadosamente as tampas dos tubos de PCR usando a ferramenta de descapsulação e descarte-as. Verifique se cada tubo contém um comprimido. Depois, transfira 50 microlitros de lisado para os tubos de PCR apropriados.
Fixe novos capacitores ópticos nos tubos de PCR usando a ferramenta de capacitação. Após montar as reações, carregue os tubos de PCR no sistema de detecção do ciclador de PCR. Depois, execute o programa e visualize os resultados conforme descrito no protocolo do fabricante.
Este protocolo demonstra o uso da PCR para detectar patógenos transmitidos por alimentos a partir de amostras enriquecidas de moscas. É significativo para o aprimoramento da segurança alimentar, permitindo a identificação rápida de patógenos.
Este método baseado em PCR permite a detecção rápida e sensível de patógenos transmitidos por alimentos a partir de amostras enriquecidas de moscas, apoiando a avaliação de riscos em estágios iniciais em fluxos de trabalho de segurança alimentar. Ao fornecer leituras de fluorescência em tempo real e amplificação específica para patógenos, aumenta a confiança preditiva na identificação de fontes de contaminação. A abordagem apoia a redução de riscos mecanicistas ao vincular a vigilância ambiental à presença de patógenos, orientando decisões de prosseguir ou não prosseguir em pesquisas pré-clínicas e translacionais de segurança alimentar.
O método se insere nas fases iniciais de descoberta até a identificação de compostos líderes, onde a detecção de patógenos ambientais orienta a validação de alvos e a preparação de ensaios para campanhas de triagem posteriores.
Vídeos relacionados
0 Visualizações
Vídeos relacionados
0 Visualizações
Vídeos relacionados
0 Visualizações
Vídeos relacionados
0 Visualizações
Vídeos relacionados
0 Visualizações
Vídeos relacionados
0 Visualizações
Vídeos relacionados
0 Visualizações
Vídeos relacionados
0 Visualizações
Vídeos relacionados
0 Visualizações
Vídeos relacionados
0 Visualizações
Última atualização: 29 agosto 2026