Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:03 min. • February 26th, 2026
Comece com um baço de camundongo pré-infectado com bactérias patogênicas.
Coloque o baço em soro salino frio tamponado com fosfato para preservar a viabilidade bacteriana.
Usando um homogeneizador, homogeneize o baço para perturbá-lo mecanicamente e liberar as bactérias intracelulares no tampão.
Isso gera uma suspensão bacteriana que reflete a carga bacteriana total dentro do baço.
Realize diluições seriadas do homogenado para reduzir a densidade bacteriana na solução e determinar com precisão a contagem bacteriana.
Em seguida, pegue uma placa de ágar nutritivo dividida em duas seções.
Placar a mesma diluição bacteriana em cada seção da placa de ágar para gerar réplicas.
Deixe a placa secar, depois inverta e incube. Durante a incubação, bactérias viáveis se multiplicam e formam colônias distintas.
Conte as colônias de cada seção da placa para calcular as unidades médias formadoras de colônias, ou CFUs, que representam a carga bacteriana total no baço durante a infecção.
O baço em um tubo de 15 mililitros contendo dois mililitros de PBS. Em seguida, utilize homogeneizadores individuais descartáveis por amostra para macerar os tecidos no gelo, seguido pela diluição serial das polpas de tecido
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