Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:57 min. • February 26th, 2026
Comece com uma cultura de Bacillus subtilis, uma bactéria do solo, cultivada em meio rico em nutrientes.
Centrifuge para pelletar as bactérias, descarte o sobrenadante e depois resuspenda o pellet em um meio quimicamente definido que suporte a formação de biofilmes.
Meça a densidade óptica da cultura para determinar a concentração bacteriana adequada.
Adicione a cultura a poços contendo meio definido para o controle e meio definido com um inibidor para o teste.
Incubar sob condições estáticas. As bactérias migram para cima e se acumulam na interface ar-líquido, onde o aumento da disponibilidade de oxigênio favorece o crescimento bacteriano.
No poço de controle, as bactérias na interface secretam componentes da matriz extracelular e formam um biofilme flutuante conhecido como película, uma camada protetora que aumenta a sobrevivência bacteriana.
No poço de teste, o inibidor interrompe a síntese da matriz, resultando em populações bacterianas dispersas.
Este ensaio mostra que inibidores bloqueiam a formação de biofilmes, que é uma característica fundamental da patogênese bacteriana.
Primeiro, selecione uma colônia única apropriada e transfira-a para 3 mililitros de caldo LB. Coloque essa cultura inicial em uma incubadora agitada por 4 horas a 37 graus Celsius. Após a incubação, retire 1,5 mililitros da cultura inicial e centrifuge por quatro minutos.
Remova cuidadosamente o sobrenadante e depois re-suspenda o pellet em 1,5 mililitros de meio MSgg. Para cultivar películas, prepare uma placa de cultura celular de 12 poços adicionando 3 mililitros de MSgg a cada poço. A alguns desses poços, adicione MSgg com um inibidor de molécula pequena em uma faixa de concentração, distribuindo a localização de diferentes concentrações ao redor do prato, para evitar efeitos de borda.
Meça a densidade óptica a 600 nanômetros da cultura inicial resuspensa. A cultura deve estar entre 0,6 e 1. Isso é fundamental para a robustez do sistema.
Inocule cada poço da placa de cultura com 3 microlitros da cultura starter suspensa. Depois, incube a placa a 23 graus Celsius por três dias em condições estáticas. Depois, retire a placa da incubadora e observe as películas.