Imagem Confocal de Biofilmes Bacterianos Induzidos por Filtrados de Escarro em Pacientes com Fibrose Cística

Incubar um coverglass com câmara contendo bactérias aderidas em um meio suplementado com filtrado de escarro derivado do paciente e apenas no meio.

O filtrado de escarro contém componentes derivados do hospedeiro que estimulam vias de sinalização bacteriana, desencadeando a produção de matrizes e a formação de biofilmes.

Uma vez formados os biofilmes, descarte o meio que contém bactérias flutuantes e componentes residuais derivados do hospedeiro.

Lave com um tampão para remover bactérias frouxamente presas.

Adicione uma mistura de coloração contendo corantes fluorescentes permeáveis e impermeáveis à membrana, e incube no escuro.

O corante permeável à membrana cruza membranas intactas, marcando bactérias viáveis e não viáveis. Em contraste, o corante impermeável entra apenas nas membranas danificadas, marcando seletivamente bactérias não viáveis.

Após a incubação, remova a solução de tingimento e lave com o tampão para eliminar o excesso de corante e reduzir a fluorescência de fundo.

Adicione um novo meio e adquira imagens usando microscopia confocal.

Biofilmos cultivados com filtrado de escarro exibem espessura aumentada, destacando o papel dos componentes derivados do hospedeiro na formaç