JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:27 min • March 31st, 2026
Comece com um camundongo pré-tratado com antibióticos para esgotar a microbiota intestinal.
Prenda suavemente o camundongo em posição ereta para alongar o esôfago.
Em seguida, pegue uma agulha gavage oral conectada a uma seringa contendo um inóculo de esporos derivados do Clostridium difficile, um patógeno bacteriano anaeróbio.
Insira a agulha gavage pela lateral da boca e avance lentamente para dentro do esôfago.
Quando a agulha atingir o esôfago médio, administre lentamente o inóculo e retire a agulha com delicadeza.
Os esporos administrados passam pelo estômago até o intestino delgado, onde os sais biliares desencadeiam a germinação nas bactérias vegetativas C. difficile .
Essas bactérias migram para o cólon anaeróbico, onde a diminuição da microbiota concorrente permite a adesão às superfícies epiteliais, a proliferação e a formação de colônias.
As bactérias colonizadas liberam toxinas que perturbam as junções epiteliais e danificam a barreira intestinal. Essa ruptura da barreira promove a translocação bacteriana para tecidos mais profundos, estabelecendo a fecção de Clostridium difficile.
Em um capuz de fluxo laminar, pegue um camundongo sujeito e imobilize a cabeça prendendo-o suavemente pela pele solta do pescoço e das costas.
Usando o dedo indicador e garantindo que o animal não vocalize ou demonstre sinais de sofrimento, imobilize ainda mais a cabeça do animal e alonge o esôfago. Mantenha o rato em posição vertical e ereto e passe suavemente a agulha gavage para a lateral da boca. Direcione a agulha do gavage ao longo do céu da boca e avance lentamente para dentro do esôfago.
Quando a agulha estiver aproximadamente na metade do esôfago, injete 25 microlitros de inoculo de esporos e então retire suavemente a agulha. Retorne o animal à gaiola e observe se há sinais de tosse ou dificuldade respiratória que possam indicar administração inadvertida de traqueia.