Quantificação de Clostridium difficile em Amostras Fecais de um Modelo de Camundongo Infectado

Comece com um camundongo cujo trato gastrointestinal é colonizado por Clostridium difficile, um patógeno bacteriano anaeróbio formador de esporos.

Irange o rato e permita que ele defece naturalmente em um tubo estéril pré-pesado.

Determine o peso líquido da amostra fecal subtraindo o peso do tubo vazio do peso total para preparar as diluições apropriadas.

Transfira a amostra para um ambiente anaeróbico para preservar a viabilidade da bactéria sensível ao oxigênio.

Adicione um buffer à amostra e a desregule mecanicamente para liberar seu conteúdo em suspensão.

Incubar para permitir que detritos maiores se depositem, retendo células bacterianas e esporos no sobrenadante.

Realize diluições seriadas do sobrenadante no buffer.

Coloque as diluições em substrato seletivo e incube sob condições anaeróbicas.

O meio promove a germinação dos esporos e o crescimento seletivo de Clostridium difficile enquanto inibe bactérias concorrentes, resultando em colônias distintas.

Conte as colônias para quantificar a carga de Clostridium difficile nas fezes e avalie a colonização gastrointestinal.

Para coletar amostras fecais de camundongos para avaliação, primeiro segure o camundongo levemente, mas firmemente, p