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Microbiologia
0 vistas • 2:26 min • March 31st, 2026
Pegue uma larva de peixe-zebra anestesiada no sulco de um molde de agarosa. Sua cabeça é posicionada para cima em um ângulo para acesso intestinal durante a injeção.
Cubra-a com agarose de baixa derretida, depois deixe que a agarose solidifique, imobilizando a larva.
Pegue uma agulha de microinjeção contendo bactérias patogênicas suspensas em uma solução de corante traçante.
Sob um estereoscópio, posicione a agulha em um ângulo e guie a agulha através da agarose até a boca larval.
Avance pelo tubo de comida até o intestino.
Injete a bactéria no lúmen intestinal e confirme a entrega usando o corante traçante. Esse método não invasivo, chamado microgavage, imita a rota natural da infecção.
Retire a agulha. Corte a agarose e transfira a larva para um meio fresco.
As bactérias se replicam e liberam toxinas que danificam o epitélio intestinal, promovendo a invasão bacteriana e colonização em tecidos mais profundos.
O modelo de infecção por peixe-zebra está pronto para análise.
Em uma placa de agarose de 1,5% com sulcos, coloque uma gota de 0,8% de agarose de baixa fusão sobre as larvas do peixe-zebra para cobrir.
Ajuste suavemente as larvas com as cabeças voltadas para cima em ângulos de 45 graus no sulco e as caudas contra a parede do sulco. Opere suavemente a agulha através da agarose, depois para a boca das larvas do peixe-zebra, passando pelo esôfago. Uma vez que a ponta da agulha esteja dentro do bulbo anterior do intestino, pressione o pedal de injeção para liberar de 0,5 a 1 nanolitro de cultura bacteriana.
Preencha o lúmen do intestino. Não deixe transbordar do esôfago ou da cloaca. Retirar suavemente a agulha da boca do peixe-zebra. Após o gavage, resgate as larvas infectadas do peixe-zebra da agarose com uma ponta flexível de microcarga, primeiro cortando a agarose e depois levantando as larvas.