Desenvolvimento de um modelo de infecção larval de peixe-zebra usando microgavage

Pegue uma larva de peixe-zebra anestesiada no sulco de um molde de agarosa. Sua cabeça é posicionada para cima em um ângulo para acesso intestinal durante a injeção.

Cubra-a com agarose de baixa derretida, depois deixe que a agarose solidifique, imobilizando a larva.

Pegue uma agulha de microinjeção contendo bactérias patogênicas suspensas em uma solução de corante traçante.

Sob um estereoscópio, posicione a agulha em um ângulo e guie a agulha através da agarose até a boca larval.

Avance pelo tubo de comida até o intestino.

Injete a bactéria no lúmen intestinal e confirme a entrega usando o corante traçante. Esse método não invasivo, chamado microgavage, imita a rota natural da infecção.

Retire a agulha. Corte a agarose e transfira a larva para um meio fresco.

As bactérias se replicam e liberam toxinas que danificam o epitélio intestinal, promovendo a invasão bacteriana e colonização em tecidos mais profundos.

O modelo de infecção por peixe-zebra está pronto para análise.

Em uma placa de agarose de 1,5% com sulcos, coloque uma gota de 0,8% de agarose de baixa fusão sobre as larvas do peixe-zebra para cobrir.

Ajuste suavemente as larvas com as cabeças voltadas para cima em ângulos de 45 graus