Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:43 min. • March 31st, 2026
Comece pelas células epiteliais nas quais a expressão da proteína adaptadora de interferon, um mediador chave da imunidade inata, foi reduzida, tornando as células mais suscetíveis à infecção por Brucella .
Substitua o meio por um meio de infecção contendo Brucella abortus que expressa proteína fluorescente verde, um patógeno intracelular facultativo, na concentração desejada.
Centrifuge a placa para promover o contato entre bactérias e células hospedeiras, depois incube para permitir a internalização bacteriana.
Lave as células com um meio contendo soro e trate-as com um antibiótico para eliminar bactérias extracelulares.
Incube ainda mais para permitir que Brucella se multiplique intracelularmente.
Lave as células com tampão e fixe-as com paraformaldeído para preservar as estruturas intracelulares.
Enxágue o excesso de fixador. Depois, adicione um tampão suplementado com detergente para permeabilizar as células.
Lave o detergente residual, depois adicione DAPI para manchar os núcleos e faça uma lavagem final.
Usando um microscópio automatizado, adquira imagens de alta capacidade da infecção por Brucella nas células epiteliais do hospedeiro.
Usando uma lavadora automática de placas, troque
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos