Monitoramento da colonização bacteriana das raízes de Arabidopsis thaliana em um sistema sem solo

Comece com mudas de Arabidopsis thaliana cultivadas em suportes de malha de baixa densidade que flutuam na superfície de um meio de crescimento líquido em um sistema sem solo.

Essas mudas foram pré-inoculadas com bactérias que colonizam a raiz e formam um biofilme.

Segure a muda e belisque suavemente o caule abaixo das folhas com uma pinça.

Depois, levante a muda da malha sem danificar a raiz, preservando a estrutura radicular colonizada.

Transfira a muda para uma placa multi-poço contendo água duplamente destilada.

Cubra a placa com folha e sonice as amostras usando um sonicador multidirecional para perturbar o biofilme e desalojar bactérias da superfície da raiz.

Após a sonicação, use a suspensão bacteriana sonicada para preparar diluições em série.

Coloque as amostras diluídas em placas de ágar e adicione contas de vidro para espalhar uniformemente as bactérias.

Remova as contas e incube as placas para permitir que bactérias viáveis formem colônias.

A formação da colônia confirma a colonização bem-sucedida das raízes por bactérias no sistema sem solo.

Após o enxágue, remova as mudas da malha colocando delicadamente pinças esterilizadas com chama abaixo das folhas, no lado da folha. Belisque levemente o caule e mexa as mudas para cima e afastando-as da malha para desalojar a raiz sem quebrá-la. Para remover bactérias das raízes das plantas, transfira mudas de cada malha para poços individuais de uma placa de sonicação de 24 poços contendo um mililitro de água duplamente destilada.

Sonice todas as amostras dentro da placa de uma vez, usando um sonicador multidirecionado, conforme descrito no manuscrito. Para quantificar as bactérias, realize-se diluições seriadas de 10 vezes das amostras sonicadas em meio de crescimento bacteriano. Espalhe usando contas de vidro estéreis e incube na temperatura ideal para bactérias até que as colônias individuais sejam contáveis.