Detecção da suscetibilidade a antibióticos bacterianos usando um microscópio de espalhamento Raman estimulado

Comece com amostras bacterianas pré-tratadas com concentrações crescentes de um antibiótico que elimina bactérias suscetíveis.

Adicione um meio de crescimento contendo óxido de deutério e a mesma concentração de antibiótico nos tubos correspondentes.

Incube os tubos sob condições de tremor.

O óxido de deutério entra nas células bacterianas, onde o deutério é incorporado às biomoléculas recém-sintetizadas, formando ligações carbono–deutério.

Centrifuge as bactérias, descarte o sobrenadante e lave.

Adicione um fixador para preservar a estrutura bacteriana.

Adicione água, centrifuge e remova o sobrenadante.

Ressuspenda as bactérias e transfira a suspensão para um vidro coberto revestido com poli-L-lisina, depois sele-o.

Coloque a amostra no palco de um microscópio de espalhamento Raman estimulado pré-calibrado ou SRS. Adicione água e diminua o objetivo.

Adquira imagens de múltiplos campos para avaliar a frequência vibracional carbono-deutério.

Em concentrações mais altas de antibióticos, o sinal de carbono-deutério diminui, indicando uma viabilidade bacteriana reduzida.

Isso possibilita uma avaliação rápida da suscetibilidade aos antibióticos ao correlacionar a intensidade do sinal SRS com a via