Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:29 min. • March 31st, 2026
Pegue uma gota de um patógeno bacteriano em um filme de parafina.
Coloque uma larva de Drosophila na gota bacteriana.
Sob um estereoscópio, use uma agulha de tungstênio para furar a larva e perfurar sua cutícula, a camada externa protetora e a epiderme subjacente.
Isso permite a entrada bacteriana na hemolinfa larval, o líquido circulatório.
Transfira as larvas infectadas para uma placa de ágar ranhurada e rica em nutrientes, contendo pasta de levedura como fonte de alimento.
Os sulcos facilitam a migração larval e evitam a desidratação.
Adicione a suspensão bacteriana restante à placa e a sele com filme de parafina.
Incube a placa em uma câmara úmida para manter a viabilidade larval.
Dentro da hemolinfa larval, células imunes chamadas hemócitos detectam as bactérias e iniciam a fagocitose.
Enquanto algumas bactérias são eliminadas após a fusão fagosmosmo–lisossomo, outras sobrevivem atrasando a fusão ou resistindo ao estresse intracelular e se replicam dentro dos hemócitos, levando a uma infecção intracelular sustentada.
As Drosophila larvae infectadas estão agora prontas para estudos de interação hospedeiro-patógeno.
Coloque a pasta de fermento em uma placa de ágar de suco de uva. Faça um corte fino no ágar onde as larvas possam migrar para evitar a secagem.
Monte uma agulha de tungstênio pontiaguda de 0,001 milímetro com pinças de fixação usando filme de parafina. Pipete 50 microlitros de C de alto título e expressão de cereja. Burnetii sobre o filme de parafina sob o microscópio estereoscópico e coloca as larvas na piscina de bactérias. Fure as larvas com uma agulha de tungstênio.
Transfira as larvas para uma placa de ágar. Transfira o meio patógeno restante para a placa de ágar e fele a placa com filme de parafina. Mantenha as larvas no prato no ar úmido até o tempo desejado após a infecção. Deixe o C. Burnetii infectou larvas na placa por 24 horas.