Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:35 min. • March 31st, 2026
Coloque uma lâmina contendo hemócitos fixos sobre o palco do microscópio confocal.
Esses hemócitos são obtidos de larvas de Drosophila melanogaster e foram infectados por um patógeno bacteriano.
Os hemócitos são marcados com proteína fluorescente verde, seus núcleos são corados com um corante azul, e as bactérias expressam proteína fluorescente vermelha para visualização.
Configure o microscópio para detectar os três fluoróforos e rastrear simultaneamente compartimentos celulares e patógenos.
Usando um objetivo de alta resolução, foque no hemócito-alvo para capturar detalhes subcelulares.
Ajuste a potência do laser e os ganhos do detector para alcançar a exposição adequada da amostra e otimizar a clareza do sinal.
Escaneie múltiplos planos Z para garantir que o nível de exposição seja adequado.
Defina as posições Z superior e inferior para imagear todo o hemócito.
Use o zoom de varredura para isolar o hemócito de interesse e adquirir uma imagem 3D de alta resolução.
Esse método permite a visualização da localização do patógeno dentro do hemócito.
Configure o microscópio confocal para imagens em três cores de DAPI, EGFP e mCherry.
Coloque a amostra no microscópio e foque na amostra usando um objetivo de abertura numérica 63X/1.4. Localize os hemócitos desejados no campo de visão para a imagem. Depois, ajuste a potência do laser e os ganhos do detector para alcançar a exposição adequada da amostra.
Verifique vários planos Z para garantir que o nível de exposição seja adequado para toda a espessura da amostra. Em seguida, encontre a posição superior e inferior no eixo Z de um hemócito inteiro. Defina essas posições como as posições de início e fim para a secção Z.
Use o zoom de varredura para obter imagens da área que contém o hemócito. Colete a série de imagens na resolução apropriada, como 1024 por 1024 pixels no plano X-Y e espaçamento de 0,3 micrômetros na dimensão Z.