Análise de Expressão Gênica de Células Únicas a partir de Patógenos Extraídos de Plantas

Pegue uma suspensão de uma bactéria patogênica isolada de uma planta infectada.

O genoma bacteriano contém uma fusão transcricional, na qual o promotor de um gene regulador da virulência também impulsiona a expressão de um gene fluorescente a jusante e sem promotor.

Durante a infecção da planta, a ativação do promotor desencadeia a produção das proteínas regulatórias e fluorescentes.

A proteína reguladora ativa genes de virulência, enquanto a fluorescência fornece uma leitura mensurável da ativação da virulência.

Centrifuge as células, descarte o sobrenadante e depois ressuspenda para obter uma suspensão concentrada.

Coloque uma gota em uma cobertura e cubra uma almofada de agarose para espalhar e imobilizar as células.

Capture uma imagem de campo claro para identificar todas as células bacterianas, depois uma imagem de fluorescência para detectar a fluorescência de célula única.

Combine ambos para visualizar diferenças de intensidade de fluorescência, que revelam subpopulações com alta, baixa ou nenhuma expressão gênica de virulência.

Essa variação fenotípica reflete uma estratégia adaptativa que aumenta a sobrevivência bacteriana durante a colonização das plantas.

Para uma análise de célu