Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 5:12 min. • March 31st, 2026
Comece com pequenos pedaços de tecido foliar resfriado nos quais o floema está infectado por um patógeno bacteriano.
Coloque as peças em um almofariz com nitrogênio líquido para inibir a atividade das nucleases degradadoras do DNA.
Moa para desestabilizar mecanicamente as células e liberar componentes intracelulares.
Use uma espátula gelada para transferir o pó, adicione o tampão de lise e faça vórtice na suspensão.
Incubar para lisar núcleos de plantas e células bacterianas, liberando DNA e RNA enquanto desnaturaliza proteínas.
Adicione RNase e incube para degradar RNA.
Adicione um tampão de precipitação de proteínas às proteínas agregadas, depois centrifuge para separá-las.
Transfira o DNA vegetal e bacteriano que contém o sobrenadante para isopropanol, precipitando o DNA em fios semelhantes a fios.
Centrífuga para coletar DNA e descartar o sobrenadante.
Lave com etanol, depois centrifuge e descarte o sobrenadante.
Seque o DNA ao ar, depois adicione um tampão de reidratação e incube para dissolver.
As amostras de DNA agora estão prontas para detecção de patógenos baseadas em PCR a jusante posteriores.
Use tesouras limpas para cortar uma folha inteira e fresca de uma árvore cítrica e coloque
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