Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:22 min. • August 31st, 2026
Inicie com um frasco de cultura contendo células de rim embrionário humano em um meio rico em nutrientes.
Substitua o meio por meio fresco contendo cloroquina para aumentar a entrega do plasmídeo nas células.
Utilize uma mistura de plasmídeos que codificam proteínas da superfície da influenza, proteínas do core lentiviral e o genoma lentiviral, juntamente com fosfato de cálcio. Incube para formar complexos de DNA com fosfato de cálcio.
Adicione a mistura às células e misture suavemente. Incube para permitir que o complexo entre nas células por endocitose. A cloroquina promove a liberação plasmidial dos endossomos.
No interior da célula, o DNA plasmidial induz a expressão de componentes tanto da influenza quanto do lentivírus.
Substitua o meio para remover os complexos em excesso.
Incube para permitir que os componentes virais sejam montados e liberados como pseudovírus, que são liberados no meio de cultura.
Colete o meio contendo os pseudovírus e centrifugue para formar um pellet de detritos celulares.
Colete o sobrenadante contendo o pseudovírus e armazene-o em temperaturas baixas para ensaios posteriores.
Para começar, prepare uma suspensão simples de células HEK 293FT em meio DMEM comple
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