Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:24 min. • August 31st, 2026
Inicie com o olho de um camundongo transgênico previamente injetado com um vírus adeno-associado (AAV) contendo o gene de interesse que codifica uma proteína fluorescente.
O camundongo carece de um gene essencial para manter a integridade da membrana limitante interna (ILM), uma barreira que separa a retina da cavidade vítrea.
A perda desse gene simula a degeneração retiniana, permitindo que o vírus penetre mais profundamente nas camadas celulares da retina.
Células retinianas infectadas expressam o gene de interesse, produzindo proteínas fluorescentes, o que as torna fluorescentes.
Agora, dissecar o olho e remover a córnea e o cristalino.
Remova cuidadosamente a retina do epitélio pigmentado da retina (RPE) e da esclera, a camada externa do olho.
Imersa o tecido no fixador.
Lave com tampão fosfato para remover o fixador residual.
Quando observado em um microscópio confocal, a fluorescência nas células retinianas indica penetração viral bem-sucedida através da membrana limitante interna comprometida.
Para montagens planas da retina, facilite a dissecação fixando os olhos enucleados em paraformaldeído a 4% por 15 a 30 minutos. Essa fixação e a fixação após a dissecação devem ser realizadas c
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