Produção e Purificação de Partículas do Vírus da Hepatite B Recombinante

Inicie com hepatócitos cultivados em uma placa revestida com colágeno.

Introduza um complexo de reagente de transfeção com dois plasmídeos: um carregando um genoma modificado do vírus da hepatite B ou HBV, e o outro codificando as proteínas estruturais virais.

Incube para permitir a entrada do plasmídeo. Dentro da célula, os genes virais são expressos para produzir proteínas estruturais e um genoma HBV modificado, que se assemblam para formar partículas de HBV recombinante.

Substitua o meio e incube para apoiar a produção e liberação de partículas virais.

Colete o meio e centrifugue para formar um pellet dos detritos.

Colete o sobrenadante e filtre-o para remover os detritos remanescentes.

Em seguida, adicione polietilenoglicol e cloreto de sódio para precipitar as partículas virais.

Centrifugue para formar o precipitado. Dissolva o precipitado em tampão e centrifugue para remover os detritos. Em seguida, sobreponha a solução sobre um colchão de sacarose.

Realize uma ultracentrifugação para sedimentar as partículas virais através do colchão.

Remova o sobrenadante e ressuspenda o pellet no meio.

Filtre a suspensão e armazene o HBV recombinante purificado em baixa temperatura para análises pos