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Microbiologia
0 vistas • 2:29 min • August 31st, 2026
Utilize larvas de mosquito de estágio inicial, que são suscetíveis à infecção viral.
Transfira as larvas para um béquer contendo água deionizada.
Introduza o densovírus recombinante, modificado para codificar um microRNA que suprime genes larvais-alvo. Incube.
As larvas absorvem o vírus, que então atinge o intestino.
O vírus ingerido atravessa o epitélio intestinal e se espalha para outros tecidos.
O vírus entra nas células larvais por endocitose e libera seu DNA no núcleo.
O DNA viral produz microRNAs.
No citoplasma, esses microRNAs se ligam ao complexo de silenciamento induzido por RNA.
O complexo se liga e cliva os RNAm larvais complementares alvo, impedindo a expressão e levando ao silenciamento gênico.
Após a incubação, lave as larvas com água deionizada para remover partículas virais não ingeridas.
Transfira as larvas para uma placa nova com alimento para recuperação.
As larvas de mosquito infectadas pelo vírus, com o gene-alvo silenciado, estão prontas para aplicações posteriores.
Lave 100 larvas de primeiro estágio de A. albopictus três vezes, utilizando água desionizada. Em seguida, transfira as larvas para um béquer contendo 95 mililitros de água desionizada.
Adicione cinco mililitros das estirpes de rAaeDV e incube as larvas por 24 horas a 28 graus Celsius. Para o sucesso da infecção das larvas, é essencial que as larvas permaneçam em contato com as partículas virais de infecção por 24 a 36 horas para garantir altas taxas de infecção. Após a incubação, lave as larvas três vezes usando água deionizada e, em seguida, transfira-as de volta para as placas. Alimente as larvas regularmente.