Entrega de Genes em Organoides Intestinais de Camundongo Utilizando Vetores Lentivirais

Inicie com organoides intestinais de camundongo que foram parcialmente dissociados para facilitar a transdução lentiviral.

Utilize os vetores lentivirais em um meio de transdução.

O lentivírus carrega um gene de interesse para integração estável no genoma do hospedeiro.

Adicione o lentivírus ao poço.

Incube a mistura para permitir a entrada viral.

O RNA viral é transcrito reversamente em DNA e integra-se ao genoma do hospedeiro.

Adicione meio de organoides e transfira a mistura para um tubo.

Centrifugar para remover quaisquer vírus não ligados.

Misture o pellet em uma matriz da membrana basal.

Coloque os organoides em um poço e permita que solidifiquem.

A matriz forma uma rede que aprisiona os organoides e fornece suporte estrutural.

Adicione meio de organoides suplementado com promotores de crescimento para apoiar a proliferação dos organoides.

Isso resulta em organoides brotantes contendo o gene transduzido, que podem ser utilizados para análises funcionais adicionais.

Transfira os organoides nesta última pequena quantidade de meio para um poço em uma placa de 48 poços.

Adicione o lentivírus de alto título previamente preparado no meio de transdução aos organoides e ressuspenda. Incube a mistu