Imagens de Fluorescência Multiplexadas de Ácidos Nucleicos Virais e Proteínas em Linfócitos Humanos Infectados

Inicie com linfócitos humanos infectados com HIV-1 em uma lamínula montada sobre uma lâmina.

Essas células foram hibridizadas com sondas que marcam fluorescentemente o RNA viral e o DNA proviral.

Incube as células em uma solução bloqueadora para evitar ligação inespecífica de anticorpos.

Introduza anticorpos primários direcionados à proteína da cápside do HIV-1.

Incubar para permitir que os anticorpos primários se liguem à proteína do capsídeo.

Lave as células com tampão para remover anticorpos não ligados.

Adicione anticorpos secundários marcados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários.

Lave os anticorpos não ligados.

Adicione um corante específico para DNA para corar os núcleos das células, depois lave para remover o corante em excesso.

Utilize imagens de fluorescência multiplexadas para detectar simultaneamente DNA viral, RNA, proteína e núcleos hospedeiros em cores distintas.

Essa visualização em nível de célula única permite o estudo de diferentes estágios do ciclo de vida viral por meio da visualização simultânea de DNA, RNA e proteínas virais em células infectadas.

Para a imunomarcação das proteínas de interesse, após a última lavagem, trate cada lamínula com 200 microlitr